Informe Nº 7
1. Tema: CROMATOGRAFÍA ASCENDENTE EN PAPEL DE AZÚCARES
2.
OBJETIVOS:
2.1
General:
Realizar
la cromatografía ascendente de azúcares, mediante el uso de papel filtro el
cual contiene una muestra desconocida.
2.2
Específicos:
- Conocer
la técnica de una cromatografía en papel
- Calcular
los factores de retención (Rf) para cada una de las muestras de azúcares
- Identificar
los diferentes azúcares utilizados, a través del cálculo de su factor de
retención
- Determinar
la muestra desconocida mediante la cromatografía
3.
MARCO TEÓRICO
Fundamento
La
cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o
polifuncionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos
naturales. En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de partición en donde
la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en
realidad forma parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases móvil y
estacionaria estarán en contacto en una gran interfase, lo que permite una
rápida obtención de una distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si
la muestra problema está formada por más de un soluto, éstos se separan por sus
diferentes coeficientes de partición. La realización de la cromatografía en
papel implica la siembra de la muestra problema en un trozo de papel de buena
calidad, en general Whatman N°1 para cromatografía analítica, que luego se
introducirá en una cuba de desarrollo de modo que el solvente (fase móvil)
ascienda por capilaridad (técnica ascendente) o descienda por capilaridad y
gravedad (técnica descendente). La fase estacionaria es un complejo celulosa -
agua que tiene un poder diferente que el del agua pura.
Etapas
de la cromatografía en papel
Siembra:
Se aplican muestras en solución a no menos de 1,5 cm del borde inferior de una
tira rectangular de papel, y a no menos de 1,5 cm de los bordes laterales,
manteniendo a su vez, entre mancha y mancha una distancia no menor de 1 cm. Se
hace un toque, se evapora el solvente, se hace otro toque, tratando de
concentrar la muestra sin superar un diámetro de la mancha de 3 mm. La siembra
es puntual para fines analíticos, y en banda para fines preparativos.
Desarrollo:
Ascendente:
el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspende colocado en
la parte superior de la cuba.
Descendente:
el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte superior de la
cuba cromatográfica. En el fondo de la cuba se coloca también un poco de
solvente para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel
se sumerge en el disolvente y se tapa herméticamente la cuba (al igual que en
la técnica ascendente). La siembra quedará en la parte superior del papel.
Bidimensional:
se corre el papel en una dirección y luego del desarrollo y secado se gira 90°
y se corre con otro solvente.
Revelado:
Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles
directamente. De lo contrario habrá que revelarlas.
Luz
UV: si los compuestos absorben esta radiación las manchas se verán con
fluorescencia. Reactivos de color: especiales para cada compuesto. Se deberá
tener en cuenta que no se pueden usar reveladores que destruyan el papel como
el ácido sulfúrico o el calor. Vapores de yodo sublimado: es un revelador
universal.
Evaluación:
Se efectúa el cálculo del Rf para cada componente de la mezcla por separado,
que es característico de cada compuesto en condiciones constantes: soporte,
temperatura, solventes, altura de desarrollo.
Figura
1. Esquema de la cromatografía ascendente en papel de azúcares
Rf
= Distancia recorrida por el compuesto desde el origen o punto de
siembra/Distancia recorrida por el solvente desde el origen o punto de siembra.
El
Rf toma valores entre 0 y 1 y puede ser usado para la identificación de los
componentes de una muestra, siempre y cuando se trate de sistemas
cromatográficos idénticos.
4.
PROCEDIMIENTO
5.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1
RESULTADOS
5.1.1
Resultado Práctico
Figura
(1) Figura(2)
En
la Figura (2), se nota la presencia de los siguientes azúcares: Sacarosa,
Maltosa, Glucosa, y Fructosa, luego de haberse realizado los cálculos
respectivos.
5.1.2
Resultado del Cálculo
Para
la muestra problema:
Rf=
x/y
Rf=
3.5/12
Rf=
0.29
Para
la muestra de glucosa:
Rf=
x/y
Rf=
2.8/12
Rf=
0.23
Para
la muestra de fructosa:
Rf=
x/y
Rf=
3.2/12
Rf=
0.27
Para
la muestra de maltosa:
Rf=
x/y
Rf=
2.3/12
Rf=
0.19
Para
la muestra de sacarosa:
Rf=
x/y
Rf=
2.7/12
Rf=
0.22
Según
los resultados obtenidos, se puede notar que en la muestra problema también hay
presencia de fructosa, en relación con el resultado de la muestra de fructosa.
5.2
DISCUSIÓN
Durante
esta práctica la cromatografía ascendente de azúcares en papel llevada a cabo
pudo permitir la identificación de los distintos azúcares utilizados, a través
de su factor de retención (Rf). Razón por la cual se obtuvieron los siguientes
valores: (0,29), (0,22), (0,19), (0,23) y (0,27); evidenciando de esta manera
la presencia además de la “muestra problema”, sacarosa, maltosa, glucosa y
fructosa respectivamente.
Cabe
recalcar que la cromatografía se realizó usando papel filtro común y no uno de
buena calidad (Whatman N°1); sin embargo se obtuvieron muy buenos resultados.
6.
CONCLUSIÓN
Este
metodo de separacion de mezclas complejas permite identificar los azúcares
presentes en el papel cromatografico.
Por
las determinaciones de los valores rf de la solución desconocida y la fructosa
se observa que son próximos por lo que se presume que la solución patrón sea
fructosa.
Los
valores de rf de las soluciones halladas en el rango de 0,30 menores a 1 (ya
especificadas en resultados) que marcan la trayectoria que realiza el solvente
desde su origen.
7.
BIBLIOGRAFÍA
file:///C:/Users/Usuario/Downloads/90529937-CROMATOGRAFIA-DE-AZUCAR.pdf
Hola! Muy interesante, me ha ayudado mucho tras complementarla con otras publicaciones acerca de la cromatografía.
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